Aċidu L-thioglutamichuwa kompost ta 'prodott naturali li huwa kkonvertit minn prekursuri bħal glukosinolat f'ħxejjex grannymonda bħal kale, ħodor tal-mustarda u brokkoli. Għandu varjetà ta 'effetti fuq is-saħħa, u huwa użat ħafna biex jipprevjeni mard kroniku bħall-kanċer, mard kardjovaskulari u dijabete. Tinstab ħafna f'pjanti kruċiferi, bħal kale, pastard, u kaboċċi. Għandu ħafna attivitajiet farmakoloġiċi, bħal kontra l-kanċer, anti-infjammatorji, antiossidattivi, newroprotettivi, eċċ. Għalhekk, il-metodu sintetiku tal-aċidu L-thioglutamic ġibed ħafna attenzjoni.
Fil-preżent, il-metodi għas-sintetizzazzjoni tal-aċidu L-thioglutamic jistgħu jinqasmu f'żewġ kategoriji: fermentazzjoni bijoloġika u sinteżi kimika. Dawn iż-żewġ metodi huma deskritti fid-dettall hawn taħt.
Metodu ta' fermentazzjoni bijoloġika ta' L-Sulforaphane:
Il-metodu ta 'fermentazzjoni bijoloġika huwa metodu ta' sintetizzazzjoni ta 'komposti b'mikro-organiżmi. Permezz tal-iskrinjar ta 'razez batterjali u l-ottimizzazzjoni tal-kundizzjonijiet tal-kultura, il-mikro-organiżmi jistgħu jipproduċu aċidu L-thioglutamic matul il-proċess ta' fermentazzjoni. Issa nstab li ħafna razez jistgħu jissintetizzaw l-aċidu L-thioglutamic, bħal Escherichia coli, Streptococcus thermophilus u l-bqija. Fosthom, il-metodu għas-sintetizzazzjoni tal-aċidu L-thioglutamic minn razez rappreżentati minn Escherichia coli huwa l-aktar komuni. Passi speċifiċi huma kif ġej:
1. Iżola razez li jipproduċu L-thioglutamate, bħal Escherichia coli, mill-ħamrija jew mit-tessut tal-pjanti;
2. Adotta kundizzjonijiet xierqa ta 'medja u kultura, bħal temperatura, valur tal-pH, ħin tal-kultura, eċċ., Biex tikkultiva Escherichia coli;
3. Ħsad il-brodu tal-fermentazzjoni ta 'Escherichia coli, wettaq ċertu ipproċessar u purifikazzjoni, u akkwista aċidu L-thioglutamic.
Metodu ta' sinteżi kimika ta' L-Sulforaphane:
Il-metodu ta 'sinteżi kimika huwa li juża l-metodu ta' reazzjoni molekulari kimika biex jissintetizza l-aċidu L-thioglutamic permezz ta 'rotot sintetiċi differenti. Fil-preżent, il-metodi ta 'sinteżi kimika huma prinċipalment maqsuma f'erba' tipi: metodu tal-melħ tal-kolin, metodu tal-klorur tas-sulfuril, metodu ta 'tnaqqis tal-karbonil, u metodu ta' agarose sulfate.
1. Metodu tal-melħ tal-kolin:
Dan il-metodu huwa wieħed mill-metodi sintetiċi komunement użati. Ipproċedi kif ġej:
① L-ewwel, L-methionine u l-kolin jirreaġixxu taħt kundizzjonijiet aċidużi biex jiġġeneraw sostitut rari tan-nitroġenu ta 'l-aċidu L-thioglutamic.
② Sostituti tan-nitroġenu li jsaħħnu u idrolizzaw f'aċidu L-thioglutamic taħt kundizzjonijiet alkalini.
Il-vantaġġ ta 'dan il-metodu huwa li r-reazzjoni hija sempliċi u faċli biex tikkontrolla, iżda r-rendiment huwa baxx.
2. Metodu tal-klorur tas-sulfonil:
Dan il-metodu juża reazzjoni ta 'sostituzzjoni elettrofilika biex jissintetizza l-aċidu L-thioglutamic. Ipproċedi kif ġej:
① Reazzjoni ta 'L-methionine u sulfonyl chloride taħt kundizzjonijiet alkalini biex tikseb L-thioglutamic acid sulfinate.
② Is-sulfinat huwa idrolizzat taħt kundizzjonijiet alkalini biex jiġġenera aċidu L-thioglutamic.
Il-vantaġġ ta 'dan il-metodu huwa li r-reazzjoni hija faċli biex tikkontrolla u r-rendiment huwa għoli, iżda jeħtieġ li juża sulfonyl chloride tossiku.
3. Metodu ta 'tnaqqis tal-karbonil:
Il-metodu huwa li tuża reazzjoni ta 'tnaqqis biex jissintetizza l-aċidu L-thioglutamic. Ipproċedi kif ġej:
①L-methionine jirreaġixxi ma' acetonimine biex jiġġenera pyridine pyrimidin-2-en-4-one u pyrimidine pyrimidin-2-en-4-one-5-sulfate fl-istess ħin
②Pyrimidine pyrimidine-2-en-4-one-5-sulfat jitnaqqas biex jinkiseb L-thioglutamic acid.
4. Metodu ta 'agarose sulfate: Dan il-metodu huwa li jirreaġixxi L-methionine u agarose sulfate taħt kundizzjonijiet aċidużi biex jiġġenera aċidu L-thioglutamic. Minħabba l-attività katalitika tajba tas-sulfat, l-effiċjenza tar-reazzjoni u s-selettività huma mtejba. Ogħla, iżda aktar ingombranti biex topera.
Fir-riċerka xjentifika, l-iskoperta ta 'L-sulforaphane hija importanti ħafna. Fost dawn, il-metodu agarose sulfate huwa wieħed mill-metodi klassiċi ta 'skoperta. Il-metodu agarose sulfate u l-passi tiegħu se jiġu deskritti fid-dettall hawn taħt.
Prinċipju sperimentali
Il-metodu ta 'agarose sulfate huwa bbażat fuq il-formazzjoni ta' kumpless isfar ta 'L-thiogalactopicrin u sulfat tal-barju, melħ iffurmat taħt kundizzjonijiet aċidużi, bl-użu ta' agarose bħala scaffold biex tissepara L- Il-metodu ta 'sulforaphane. Il-metodu huwa bbażat fuq il-fatt li taħt kundizzjonijiet aċidużi, il-kumpless isfar iffurmat mir-reazzjoni ta 'sulforaphane tal-barju u L-sulforaphane ma jinħallx faċilment fl-ilma u jippreċipita f'agarose, sabiex jissepara u jiskopri L-sulforaphane.
Passi sperimentali:
Pass 1: Ipprepara s-sospensjoni agarose-barium sulfate
Iżen ammont xieraq ta 'agarose u sulfat tal-barju, żid ċertu ammont ta' ilma distillat wara li tħallat u ħawwad sewwa, saħħan sakemm tinħall jew imħallat b'mod uniformi, iffiltra s-sospensjoni b'filtru b'daqs tal-pori ta' 0.22um, u imbagħad għalli għal 3 sa 5 minuti. Meta s-sospensjoni tiksaħ għal taħt il-50 grad iżda xorta ma tissolidifikax, ferra s-soluzzjoni ġo dixx Petri u poġġiha f'temperatura tal-kamra sakemm tissolidifika.
Pass 2: Preparazzjoni u pproċessar tal-kampjun:
Iżen il-kampjun jew l-istandard li jrid jiġi ttestjat, żid biżżejjed {{0}}.01 M soluzzjoni ta' pirofosfat tas-sodju biex tinħall, żid il-volum korrispondenti ta' kloroform għall-estratt, ċentrifuga għal 10-15 minuti , neħħi l-likwidu tas-saff ta 'fuq, evapora l-kloroform biex tiġbor ir-residwu, żid 2 mL ta' ilma u 2 mL ta 'aċidu idrokloriku kkonċentrat, estratt mill-ġdid bil-kloroform, ċentrifugat, u ttieħed is-saff ta' fuq. Ħu 24mL tal-likwidu ta 'fuq, żid 0.2 mL ta' 2 fil-mija soluzzjoni ta 'nitrat tar-ram u 0.4 mL ta' soluzzjoni ta '5 fil-mija ta' nitrat taċ-ċomb, estratt darba bil-kloroform, ċentrifuga, u ħu l-likwidu ta 'fuq, li jista' jintuża bħala kampjun sperimentali għall-ittestjar.
Pass 3: Esperiment ta' analiżi mill-ġdid:
Il-kampjuni ġew miżjuda mas-sospensjoni agarose-barium sulfate u msaħħna f'banju ta' l-ilma biex jissolidifikaw fi 80 grad għal sagħtejn. Wara li l-kampjun jiġi ssolidifikat, is-sospensjoni tas-sulfat tal-agarose-barju titkessaħ sat-temperatura tal-kamra, u l-kumpless tal-kampjun tal-agarose-sulfat tal-barju jiġi maħlul taħt il-kundizzjonijiet buffer tal-aċidu ċitriku u l-melħ tal-ammonju. Fl-aħħarnett, laħlaħ bl-ilma sekwenzjali, u viżwalment spezzjona l-kulur tal-kumpless fl-isfera agarose.
Pass 4: Analiżi tar-riżultat:
Kejjel l-assorbiment tal-filtrat wara analiżi mill-ġdid biex tibni kurva standard, u b'hekk tikseb il-kontenut ta' L-sulforaphane.
Il-metodu agarose sulfate huwa metodu klassiku għas-separazzjoni u l-iskoperta ta 'L-sulforaphane. Permezz ta 'serje ta' passi, L-sulforaphane jista 'jiġi separat u l-kontenut tiegħu jinstab. Il-metodu għandu l-vantaġġi ta 'sempliċità, sensittività għolja, u riżultati preċiżi, u huwa komunement użat fl-iskoperta ta' L-sulforaphane fl-ikel, kożmetiċi, u farmaċewtiċi.
Sommarju: Bl-iżvilupp tax-xjenza u t-teknoloġija, il-metodu ta 'sintetizzazzjoni tal-aċidu L-thioglutamic qed jiġi ottimizzat u mtejjeb kontinwament. Fl-istess ħin, il-metodu ta 'fermentazzjoni bijoloġika u l-metodu ta' sinteżi kimika għandhom ukoll il-vantaġġi u l-iżvantaġġi tagħhom stess, u liema metodu għandu jintuża jiddependi fuq is-sitwazzjoni attwali.