Thiazolyl Blue CAS 298-93-1

Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd huwa wieħed mill-manifatturi u l-fornituri l-aktar esperjenzati ta 'thiazolyl blue cas 298-93-1 fiċ-Ċina. Merħba għall-bejgħ bl-ingrossa bl-ingrossa ta 'kwalità għolja thiazolyl blue cas 298-93-1 għall-bejgħ hawn mill-fabbrika tagħna. Servizz tajjeb u prezz raġonevoli huma disponibbli.

Thiazolyl blu, magħrufa aħjar bħala MTT (3-(4,5-dimethylthiazol{-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide), għandha duwalità affaxxinanti - hija kemm għodda vitali fil-bijoloġija taċ-ċelluli kif ukoll oddità kimika kameleonika. Dan it-trab kristallin isfar jgħaddi minn metamorfosi startling fiċ-ċelloli ħajjin: reductases mitokondrijali jaqtgħu ċ-ċirku tat-tetrazolium tiegħu, u jibdluh f'preċipitat formazan vjola li ma jinħallx - reazzjoni tant impressjonanti viżwalment li saret l-istandard tad-deheb għall-kejl tal-vijabbiltà taċ-ċelluli. Iżda lil hinn mill-bank tal-laboratorju, MTT jiżvela imgieba aktar esoteriċi; l-istruttura kristallina tagħha tifforma mudelli partikolari ta '"herringbone" taħt mikroskopija, filwaqt li l-proprjetajiet redox tagħha jippermettulu li jipparteċipa f'reazzjonijiet fotokimiċi eżotiċi meta jkun espost għal wavelengths speċifiċi ta' dawl. B'mod kurjuż, il-kompost juri fenomenu rari imsejjaħ "metachromasia"-li jidhru kuluri differenti skont il-konċentrazzjoni u l-ambjent molekulari-proprjetà darba sfruttata minn kimiċi tat-tessuti biex joħolqu żebgħa "intelliġenti". Studji reċenti kixfu r-rwol mhux mistenni tiegħu bħala inibitur dgħajjef ta 'ċerti enzimi tal-katina respiratorja, u jagħtu ħjiel li dan ir-reaġent tal-assaġġ kullimkien seta' kien qed jinfluwenza b'mod sottili l-proċessi metaboliċi ħafna li x-xjenzati jużawh biex jistudjaw. Meta maħlul f'solventi organiċi, is-soluzzjonijiet MTT juru effett mhux tas-soltu tat-tifi tal-fluworexxenza li ħawwad lill-kimiċi fiżiċi, li jissuġġerixxi interazzjonijiet intermolekulari kumplessi li għadhom qed jistennew spjegazzjoni sħiħa.

Thiazolyl Blue,L-isem kimiku huwa 3- (4,5-dimethyl-2-thiazole) -2,5-diphenyltetrazolium bromide, imqassar bħala MTT, li huwa kompost organiku importanti. Peress li Mosman irrapporta l-ewwel darba l-użu tat-tbajja 'MTT biex jiddetermina t-tkabbir taċ-ċelluli u s-sopravivenza fl-1983, MTT ġie applikat b'mod wiesa' f'oqsma bħax-xjenzi tal-ħajja, ir-riċerka medika u l-iżvilupp tad-droga. Din li ġejja hija spjegazzjoni dettaljata tal-iskop tagħha:

Applikazzjoni fir-Riċerka tal-Bijoloġija taċ-Ċelluli

 

MTT huwa wieħed mill-metodi klassiċi għad-determinazzjoni tal-proliferazzjoni taċ-ċelluli. Matul il-kultura taċ-ċelluli, dehydrogenases bħal succinate dehydrogenase fil-mitokondrija taċ-ċelluli ħajjin jistgħu jnaqqsu l-MTT eżoġenu għal formazan kristallin vjola blu li ma jinħallx, li jiddepożita fiċ-ċellula. Iċ-ċelloli mejta m'għandhomx din il-kapaċità ta' tnaqqis u għalhekk ma jipproduċux formazan. Billi tħoll formazan fiċ-ċelloli u tkejjel il-valur ta 'assorbiment tad-dawl tiegħu f'tul ta' mewġ speċifiku (bħal 490nm jew 562nm) bl-użu ta 'qarrej ta' enzima-immunosorbent assay (ELISA), in-numru ta 'ċelluli ħajjin jista' jiġi rifless indirettament. F'ċerta firxa ta 'numri ta' ċelluli, l-ammont ta 'kristalli MTT iffurmati huwa proporzjonali għan-numru ta' ċelloli, għalhekk il-proliferazzjoni taċ-ċelluli tista 'tiġi ddeterminata abbażi tal-valur ta' assorbiment imkejjel (valur OD).

Applikazzjoni fir-Riċerka tal-Bijoloġija taċ-Ċelluli

 

MTT jista 'jintuża wkoll biex jiddetermina t-tossiċità ta' drogi jew metodi ta 'trattament oħra (bħal irradjazzjoni tar-radjazzjoni) fuq ċelloli kkultivati ​​in vitro. Billi jitqabblu l-valuri OD tal-grupp ta 'trattament u l-grupp ta' kontroll, l-effett tad-drogi jew metodi ta 'trattament fuq l-attività taċ-ċelluli jista' jiġi evalwat. Iktar ma jkun kbir il-valur OD, iktar tkun b'saħħitha l-attività taċ-ċellula; Għall-kuntrarju, tindika li iktar ma tkun dgħajfa l-attività taċ-ċelluli jew akbar tkun it-tossiċità taċ-ċelluli. Dan il-metodu għandu applikazzjonijiet wiesgħa fl-iskrinjar tad-droga, riċerka tossikoloġija, u oqsma oħra. Għalkemm MTT jintuża prinċipalment biex ikejjel il-proliferazzjoni taċ-ċelluli u ċ-ċitotossiċità, f'xi każijiet, jista 'jintuża wkoll biex jassisti fl-istudju tal-apoptosi taċ-ċelluli. Matul il-proċess ta 'apoptosi taċ-ċelluli, l-attività ta' l-enzima ġewwa ċ-ċellula tinbidel, li tista 'taffettwa l-kapaċità ta' tnaqqis ta 'MTT. Billi tqabbel id-differenza fil-valuri OD bejn ċelluli apoptotiċi u ċelloli normali, l-okkorrenza ta 'apoptożi taċ-ċelluli tista' tiġi determinata b'mod preliminari. Madankollu, għandu jiġi nnutat li l-MTT mhuwiex metodu speċjalizzat għall-iskoperta tal-apoptożi taċ-ċelluli, u r-riżultati tiegħu jeħtieġ li jiġu analizzati b'mod komprensiv flimkien ma 'metodi oħra ta' sejbien tal-apoptożi.

Applikazzjoni fl-iżvilupp tad-droga

 

Fil-proċess ta 'żvilupp tad-droga, l-assaġġ MTT huwa metodu ta' screening tad-droga b'rendiment għoli ta'-użu. Permezz ta 'koinkubazzjoni tad-droga tat-test ma' ċelloli u bl-użu ta 'assaġġ MTT biex ikejjel il-bidliet fl-attività taċ-ċelluli, molekuli ta' droga attiva potenzjali jistgħu jiġu skrinjati malajr. Dan il-metodu għandu l-vantaġġi ta 'tħaddim faċli, riżultati affidabbli, u throughput għoli, u għandu valur ta' applikazzjoni importanti fl-istadju bikri tal-iżvilupp tad-droga. L-assaġġ MTT jista 'jintuża wkoll biex jistudja l-mekkaniżmu ta' azzjoni tad-drogi. Billi jitqabblu l-bidliet fl-attività taċ-ċelluli taħt kundizzjonijiet differenti ta 'trattament tad-droga, l-impatt tad-drogi fuq proċessi bħall-proliferazzjoni taċ-ċelluli u l-apoptosi jista' jiġi ddeterminat b'mod preliminari. Billi tgħaqqad tekniki oħra ta 'bijoloġija molekulari bħal Western blot u ċitometrija tal-fluss, il-miri u l-mogħdijiet ta' sinjalazzjoni tad-drogi jistgħu jiġu żvelati aktar. Fl-evalwazzjoni tas-sigurtà tad-droga, l-assaġġ MTT jista 'jintuża biex jevalwa l-effetti tossiċi tad-drogi fuq iċ-ċelloli. Billi tkejjel il-bidliet fil-valur OD taċ-ċelloli wara t-trattament tad-droga, huwa possibbli li jiġi ddeterminat jekk il-mediċina għandhiex ċitotossiċità u s-saħħa tat-tossiċità. Dan huwa ta 'sinifikat kbir biex tiggwida r-riċerka preklinika u l-applikazzjoni klinika tal-mediċini.

L-applikazzjoni tal-MTT f'oqsma oħra

 

Fir-riċerka immunoloġika, l-assaġġ MTT jista 'jintuża biex jiddetermina l-kapaċità ta' proliferazzjoni tal-limfoċiti. Billi koinkuba l-limfoċiti b'antiġeni jew immunostimulanti u billi tkejjel il-bidliet fl-attività taċ-ċelluli bl-użu tal-assaġġ MTT, il-kapaċità tar-rispons immuni tal-limfoċiti tista' tiġi evalwata. Dan il-metodu għandu applikazzjonijiet wiesgħa fl-iżvilupp tal-vaċċini, immunoterapija, u oqsma oħra. Fir-riċerka tal-onkoloġija, l-assaġġ MTT jista 'jintuża biex jiddetermina l-attività ta' proliferazzjoni u s-sensittività tad-droga taċ-ċelloli tat-tumur. Billi jitqabblu l-bidliet fil-valuri OD taċ-ċelloli tat-tumur taħt kundizzjonijiet differenti ta 'trattament tad-droga, molekuli tad-droga b'effetti inibitorji fuq iċ-ċelloli tat-tumur jistgħu jiġu skrinjati u l-effetti tagħhom kontra-tumur jistgħu jiġu evalwati. Dan huwa ta 'sinifikat kbir biex jiggwida t-trattament kliniku tat-tumuri. Fir-riċerka tat-tossikoloġija ambjentali, l-assaġġ MTT jista 'jintuża biex jevalwa l-effetti tossiċi ta' inkwinanti ambjentali fuq iċ-ċelloli. Permezz ta' ko-inkubazzjoni ta' ċelloli b'konċentrazzjonijiet differenti ta' sustanzi li jniġġsu u billi tkejjel il-bidliet fl-attività taċ-ċelluli bl-użu tal-assaġġ MTT, jistgħu jiġu determinati t-tossiċità u l-mekkaniżmu ta 'azzjoni tas-sustanzi li jniġġsu. Dan huwa ta 'sinifikat kbir għall-valutazzjoni tar-riskji ekoloġiċi ta' inkwinanti ambjentali u l-formulazzjoni ta 'politiki ta' protezzjoni ambjentali. 

Passi sperimentali tathiazolyl blumetodu:

1: Trypsin jiddiġerixxi ċ-ċelloli tal-fażi logaritmika, tiċċentrifu u tiġborhom wara t-terminazzjoni biex tagħmel is-sospensjoni taċ-ċelluli, u taġġusta l-konċentrazzjoni tagħha għal 5-10 b'għadd ta 'ċelluli × 104/ml. Għal dawk li jibdew, huwa meħtieġ li ċ-ċelloli jilħqu 5-10 × 104/ml ħafna drabi ma tkunx taf minn fejn tibda. Jien hawn biex nipprovdulek metodu sempliċi biex inizjalment tiddetermina n-numru ta 'ċelloli.

Ħu 25cm2 komunement użati għall-kultura taċ-ċelluli bħala eżempju:

1) Id-densità taċ-ċelluli hija madwar 80% ~ 90% (il-figura hawn taħt turi l-istat approssimattiv taċ-ċelloli f'densità ta '80% ~ 90%). Wara d-diġestjoni u ċ-ċentrifugazzjoni, neħħi s-supernatant, u żid 3ml medium biex tħallat.

2) Ħu tubu ċentrifugu sterili ġdid ta '15ml (għall-pass li jmiss ta' inokulazzjoni ta 'pjanċa ta' 96 bir) u imla b'madwar 9ml medju

3) Ħu 1ml mis-sospensjoni taċ-ċelluli 3ml ippreparata fl-ewwel pass, żidha fit-tubu ta 'fuq, u għodd iċ-ċelloli wara t-taħlit. F'dan iż-żmien, ġeneralment huwa 5-10 jew inqas × 104/ml, li huwa ekwivalenti għal 5-10 ċelluli għal kull ċellula f'4 ċelluli tal-bord tal-għadd taċ-ċelluli (ara l-figura hawn taħt); Jekk il-konċentrazzjoni ma tkunx biżżejjed, is-sospensjoni taċ-ċelluli għandha tiżdied skont ir-riżultat tal-għadd, u kull qatra għandha tiġi kkalkulata bħala 50ul.

4) In-numru ta 'ċelluli għandu jiġi aġġustat skond l-għanijiet differenti ta' l-esperiment. Pereżempju, f'esperiment ġenerali ta 'proliferazzjoni taċ-ċelluli, jistgħu jintużaw 2000 ċellula għal kull bir (ekwivalenti għal densità ta' sospensjoni taċ-ċelluli ta '2 × 104 / ml), 5000 sa 10000 ċellula għal kull bir (ekwivalenti għal densità ta' sospensjoni taċ-ċelluli ta '5 × 104 / ml). Barra minn hekk, in-numru ta 'ċelloli għandu wkoll jiġi determinat skond il-karatteristiċi tagħhom stess, bħall-veloċità tat-tkabbir. Pereżempju, id-densità taċ-ċelloli li qed jikbru aktar malajr tista 'tkun kemmxejn iżgħar.

2. Wara li tħejji s-sospensjoni taċ-ċelluli, ħawwadha bil-mod u żid 100ul f'kull toqba, sabiex id-densità taċ-ċelloli li għandhom jiġu ttestjati tkun 5000-10000/toqba (it-toqba tat-tarf hija mimlija b'PBS sterili).

L Nota: Minħabba li ċ-ċelloli se jkomplu jissetiljaw wara t-taħlit, huwa meħtieġ li jitħalltu ripetutament matul il-proċess tat-tilqim, bħal taħlit darba kull sitt toqob, biex jiġi żgurat li d-densità taċ-ċelluli tat-tilqim tkun eżattament l-istess bejn it-toqob, li hija kruċjali għar-riżultati tal-MTT.

3. Poġġi l-pjanċa tal-kultura taċ-ċelluli mlaqqma fl-inkubatur għall-kultivazzjoni sakemm il-monosaff taċ-ċellula jiġi mgħotti bil-qiegħ tat-toqba (pjanċa ċatta ta '96 toqba), u żid il-mediċina bi gradjent ta' konċentrazzjoni. Fil-prinċipju, il-mediċina tista 'tiżdied wara li ċ-ċellula tkun imwaħħla mal-ħajt, jew sagħtejn, jew nofs ġurnata, iżda ħafna drabi nżidu l-mediċina wara nofsinhar tal-ġurnata ta' qabel, u l-għada filgħodu. Ġeneralment, 5-7 gradjenti, 100ul kull toqba, u 3-5 toqob multipli huma stabbiliti. Huwa rakkomandat li tissettja 6, inkella huwa diffiċli li tirrifletti s-sitwazzjoni reali. Il-figura li ġejja tista 'tintuża bħala pass ta' referenza għal pjanċa ta '96 toqba.

L Għad-dożaġġ, xi nies iżidu direttament id-drogi fi pjanċi ta '96 bir b'volumi differenti biex jiffurmaw gradjent ta' konċentrazzjoni. Imma naħseb li għandna nippruvaw inħalltu konċentrazzjonijiet differenti ta 'drogi fit-tubu EP, imbagħad neħħi s-supernatant tal-kultura mill-pjanċa ta' 96 bir (li tista 'tiġi miġbuda 'l bogħod b'pistola ta' kwittanza) u żid 100ul ta 'medja ta' kultura li jkun fiha konċentrazzjonijiet differenti ta 'drogi, li jistgħu jiżguraw l-eżattezza tal-konċentrazzjoni tad-droga. Barra minn hekk, għandu jiġi nnutat li jekk dan il-metodu jintuża, ma terdax is-soluzzjoni kollha tal-kultura tal-pjanċa ta '96-well qabel ma żżid il-mediċina. Għandek iżżid kampjuni immedjatament wara li terda parti minnha biex tevita l-mewt taċ-ċelluli minħabba t-tnixxif tal-pjanċa ta '96-well.

Inkuba b'4.5% CO2 f'37 grad għal 16-48 siegħa, u osserva l-effett tal-mediċina taħt il-mikroskopju maqlub. Il-figura li ġejja turi gradjent ta 'mediċina tipika ta' ċitotossiċità.

4. Żid 10ul MTT soluzzjoni (5mg/ml, jiġifieri . 0.5% MTT) ma' kull bir u kompli kultiva għal 4h. Jekk il-mediċina tista 'tirreaġixxi ma'thiazolyl bluis-soluzzjoni tal-kultura tista 'tiġi mormija wara ċ-ċentrifugazzjoni, u s-soluzzjoni tal-kultura li fiha MTT tista' tiżdied wara li tinħasel b'PBS għal 2-3 darbiet.

5. Waqqaf il-kultura u pprepara għal dissoluzzjoni u kristallizzazzjoni.

Thiazolyl Blue, li l-isem Ċiniż tiegħu huwa Methyl Blue, huwa kompost organiku importanti li jintuża ħafna fil-mediċina, il-bijoloġija u l-kimika. fil-mediċina, ħafna drabi tintuża biex tikkura l-avvelenament tan-nitrit, l-avvelenament taċ-ċjanur, eċċ., U tintuża wkoll fid-dijanjosi u t-trattament awżiljarju ta 'xi mard; Fir-riċerka bijoloġika, tista' tintuża bħala aġent tat-tbajja' għat-tikkettar ta 'ċelloli jew tessuti. Madankollu, bħal ħafna mediċini, il-blu tal-metil jista 'jkollu wkoll serje ta' effetti sekondarji waqt l-użu:

Effetti sekondarji tas-sistema diġestiva

Dardir u rimettar huma wieħed mill-effetti sekondarji komuni tas-sistema diġestiva tal-methylene blue. Meta l-blu tal-metilin jidħol fil-ġisem, jista 'jistimula l-mukuża gastrointestinali, u jikkawża dardir u anke rimettar f'każijiet severi. Dan is-sintomu huwa aktar evidenti meta l-veloċità tal-injezzjoni ġol-vini tkun mgħaġġla wisq jew id-dożaġġ ikun kbir wisq. Pereżempju, f'xi każijiet kliniċi, il-pazjenti jistgħu jesperjenzaw dardir u rimettar sinifikanti ftit wara injezzjoni rapida fil-vini ta 'methylene blue, li taffettwa l-kumdità u l-esperjenza tat-trattament tagħhom. Xi pazjenti jistgħu jesperjenzaw uġigħ addominali wara li jużaw methylene blue, u l-grad ta 'uġigħ jista' jvarja skont id-differenzi individwali, li jvarja minn skumdità ħafifa għal uġigħ aktar sever.

Fl-istess ħin, tista 'wkoll tkun akkumpanjata minn dijarea, li tista' tkun dovuta għall-interferenza ta 'methylene blue fuq peristalsi intestinali u funzjoni diġestiva, li twassal għal moviment intestinali anormali u bidliet fis-sekrezzjoni tal-fluwidu diġestiv. L-okkorrenza fit-tul jew frekwenti ta' uġigħ addominali u dijarea mhux biss taffettwa l-assorbiment tan-nutrijent tal-pazjent u saħħa fiżika oħra, iżda tista 'wkoll twassal għal kumplikazzjonijiet oħra.

Effetti sekondarji tas-sistema urinarja

Wara li tuża l-blu tal-metilen, il-kulur tal-awrina jinbidel blu, li huwa kkawżat mill-eskrezzjoni tal-blu tal-metilin u l-metaboliti tiegħu fl-awrina permezz tal-kliewi. B'mod ġenerali, din il-bidla fil-kulur tal-awrina hija temporanja u mhux se jkollha impatt serju fuq is-saħħa fiżika. Iżda f'xi każijiet speċjali, bħal pazjenti b'mard tas-sistema urinarja, bidliet fil-kulur tal-awrina jistgħu jinterferixxu mad-dijanjosi tal-marda, u t-tobba jeħtieġ li jwettqu analiżi komprensiva bbażata fuq indikaturi oħra tal-eżami. Waqt l-awrina, xi pazjenti jistgħu jħossu sensazzjoni ta’ tingiż fil-ftuħ tal-uretra.

 

Dan jista 'jkun minħabba l-effett stimulanti tal-methylene blu fuq il-mukuża tal-uretra, speċjalment meta l-konċentrazzjoni tal-awrina tkun għolja jew il-mukuża tal-uretra tingħorok waqt l-awrina, is-sensazzjoni ta' tingiż tkun aktar evidenti. Dan is-sintomu jista 'jikkawża ċertu skumdità lill-pazjenti u jaffettwa l-ħajja tagħhom ta' kuljum.

Effetti sekondarji newroloġiċi

Sturdament u uġigħ ta 'ras huma effetti sekondarji newroloġiċi komuni ta' methylene blue. Wara li tuża methylene blue, il-pazjenti jistgħu jħossuhom sturduti u diżorjentati fir-ras, jew jesperjenzaw skumdità bħal nefħa u uġigħ fir-ras. Dan is-sintomu jista 'jaffettwa l-attenzjoni tal-pazjent u l-ħila tal-ħsieb, u jnaqqas l-effiċjenza tax-xogħol u tal-ħajja. L-okkorrenza ta 'sturdament u uġigħ ta' ras tista 'tkun relatata mal-effetti tal-blu tal-metilen fuq il-vini u n-nervituri tal-moħħ, u l-mekkaniżmu speċifiku għadu jeħtieġ aktar riċerka. F'każijiet rari, methylene blue jista 'jikkawża disturbi fis-sensi bħal ngħas, koma, eċċ.

Dan ġeneralment ikun dovut għal użu eċċessiv ta 'methylene blue jew pazjenti li huma sensittivi żżejjed għall-mediċina, li jikkawżaw inibizzjoni severa tas-sistema nervuża ċentrali. Disturbi fis-sensi huma effett sekondarju serju li jista’ jipperikola s-sigurtà tal-ħajja tal-pazjent u jeħtieġ trattament ta’ salvataġġ immedjat.

1.X'inhu l-użu ta 'thiazolyl blue tetrazolium bromide?

Thiazolyl Blue Tetrazolium Blue (MTT) jista' jintuża fil-kejl tal-proliferazzjoni taċ-ċelluli. MTT jipproduċi soluzzjoni safranija li tiġi kkonvertita f'MTT formazan blu skur,-insolubbli fl-ilma minn dehydrogenases mitokondrijali ta' ċelloli ħajjin.

2.Is Thiazolyl Blue sikur biex taħżen?

Kundizzjonijiet tat-Temperatura: Issiġilla t-trab u aħżen fi friġġ fi -20 grad għall-preservazzjoni tal-iffriżar, li jista 'jestendi b'mod effettiv il-ħajja fuq l-ixkaffa (ġeneralment 1-2 snin); għal ħażna għal żmien qasir (fi żmien xahar), jista 'jinżamm temporanjament taħt kundizzjonijiet ta' refriġerazzjoni ta '4 gradi.

Rekwiżiti tal--prova tad-dawl u tal--umdità: It-trab MTT huwa sensittiv-d-dawl u għandu jinħażen fi fliexken tar-reaġenti kannella jew fliexken trasparenti mgeżwra b'fojl tal-landa. Sadanittant, aġenti tat-tnixxif (eż., ġel tas-silika) għandhom jiġu miżjuda biex jipprevjenu t-trab milli jassorbi l-umdità u t-tagħqid.

3.Se jinbidel il-kulur Thiazolyl Blue?

Meta s-soluzzjoni turi preċipitat vjola blu jew tiskura fil-kulur, tindika li ġiet ossidizzata u ma tistax tkompli tintuża.
Evita li tpoġġi s-soluzzjoni f'temperatura tal-kamra jew f'ambjent ħafif, peress li tista' tfalli malajr.

It-tags Popolari: thiazolyl blue cas 298-93-1, fornituri, manifatturi, fabbrika, bl-ingrossa, jixtru, prezz, bl-ingrossa, għall-bejgħ