Sephadex G75huwa tip ta 'mili tal-filtru tal-ġel b'rendiment tajjeb. Huwa ppreparat minn crosslinking dextran u epichlorohydrin. Huwa ġel b'forma ta 'żibeġ b'ammont kbir ta' gruppi idrossiliċi, li huwa faċli biex jintefħu f'soluzzjonijiet ta 'ilma u elettroliti. Il-limitu massimu ta 'esklużjoni ta' dan il-kompost huwa 80000, u l-grad ta 'nefħa speċifika jiddependi fuq l-ammont ta' raża niexfa u kundizzjonijiet ta 'tħaddim. Pereżempju, taħt ċerti kundizzjonijiet, il-grad ta 'nefħa ta' raża niexfa jista 'jkun 519ml / g. Meta l-firxa tal-pH operattiv hija 6.210 (5.210 għal xi prodotti), il-kompost jista 'jibqa' stabbli. Huwa rrakkomandat li tinħażen f'temperatura tal-kamra, friska, u 'l bogħod mid-dawl fil-firxa tat-temperatura ta' 430 grad (jew 425 grad) biex iżżomm il-prestazzjoni u l-istabbiltà tagħha. Din is-sustanza hija partikolarment adattata għal bijomolekuli kbar b'piż molekulari akbar minn 80000. Użat prinċipalment għad-desalinizzazzjoni u s-sostituzzjoni tal-bafers ta 'bijomolekuli daqshekk kbar. Permezz ta 'operazzjoni ta' pass waħda -, huwa possibbli li titneħħa malajr, tneħħi sustanzi li jniġġsu, u tittrasferixxi molekuli għal soluzzjoni buffer ġdida. Minbarra d-desalinizzazzjoni u s-sostituzzjoni tal-bafers, Sephadex G-75 huwa wkoll adattat għall-proċess ta 'purifikazzjoni ta' bijomolekuli kbar.
 |
 |
Sephadex G75huwa ġel dextran, li huwa prinċipalment użat għas-separazzjoni u t-teknoloġija tal-purifikazzjoni fil-bijokimika u l-bijoloġija molekulari. L-użi ewlenin ta 'din is-sustanza huma kif ġej:
Fil-proċess ta 'desalinizzazzjoni, jista' jneħħi b'mod effettiv l-imluħa (ġeneralment melħ inorganiku ta 'molekula żgħira) minn soluzzjonijiet molekulari bijoloġiċi. Il-vantaġġ ta 'din is-sustanza huwa li huwa faċli biex topera, malajr, u tista' tikseb desalinizzazzjoni effettiva mingħajr ma tbiddel l-attività tal-bijomolekuli. Barra minn hekk, minħabba l-istabbiltà kimika eċċellenti tagħha u l-bijokompatibilità, huwa adattat għat-trattament ta 'desalinizzazzjoni ta' bijomolekuli varji, inklużi proteini, peptidi, aċidi nuklejiċi, eċċ. F'applikazzjonijiet prattiċi, id-deniġġ tal-ġel huwa ġeneralment ikkombinat ma 'teknoloġiji oħra ta' purifikazzjoni bħal skambju ta 'joni, kromatografija ta' affinità, eċċ., Biex jiksbu purifikazzjoni komprensiva u separazzjoni ta 'bijomolekules.
Din is-sustanza għandha firxa wiesgħa ta 'applikazzjonijiet fis-sostituzzjoni tal-bafers, speċjalment fl-oqsma tal-bijokimika u l-bijoloġija molekulari. Pereżempju, fil-proċess ta 'purifikazzjoni tal-proteina, xi kultant huwa meħtieġ li jiġu trasferiti proteini minn sistema buffer għal sistema ta' buffer oħra li hija aktar adattata għall-istabbiltà u l-attività tagħhom. U din is-sustanza tista 'tikseb b'mod effettiv dan il-għan; Fil-proċess ta 'estrazzjoni ta' aċidu nuklejku, huwa wkoll meħtieġ li tissepara l-aċidu nuklejku mis-soluzzjoni li fiha impuritajiet u mluħa, u tittrasferixxiha għal buffer ġdid għal operazzjonijiet sussegwenti. Huwa applikabbli wkoll għal dan ix-xenarju; Matul il-kultura taċ-ċelluli, xi kultant huwa meħtieġ li jiġi sostitwit il-medju tal-kultura jew buffer biex iżomm it-tkabbir u l-attività taċ-ċelluli. Jista 'jintuża biex jitneħħew sustanzi ta' ħsara minn mezzi ta 'kultura antika jew buffers u jintroduċu midja jew buffers ta' kultura ġodda.
Sieving molekulari
Fil-proċessi ta 'riċerka u preparazzjoni tal-proteini, ġeneralment huwa meħtieġ li jiġu separati proteini fil-mira minn taħlitiet kumplessi. Jista 'jissepara proteini bbażati fuq id-daqs tagħhom, u b'hekk jinkiseb purifikazzjoni tal-proteina. Bl-aġġustament tal-kundizzjonijiet ta 'elużjoni, bħalma huma s-saħħa tal-joni u l-valur tal-pH ta' l-eluent, l-effiċjenza ta 'separazzjoni tal-proteini tista' tiġi ottimizzata aktar. Minbarra l-proteini u l-aċidi nuklejiċi, jista 'jintuża wkoll għas-separazzjoni u l-purifikazzjoni ta' bijomolekuli oħra, bħal polisakkaridi, enzimi, antikorpi, eċċ. Il-veloċità tal-moviment ta 'dawn il-bijomakromolekuli fil-ġel tiddependi fuq id-daqs u l-għamla tagħhom, sabiex tinkiseb separazzjoni effettiva. Għalkemm din is-sustanza ma tintużax direttament bħala għodda għad-determinazzjoni tal-piż molekulari, tista 'sservi bħala għodda awżiljarja fid-determinazzjoni tal-piż molekulari.
Fil-proċess ta 'purifikazzjoni tal-proteina, ġeneralment huwa meħtieġ li jitneħħew impuritajiet żgħar tal-molekula bħal mluħa, metaboliti żgħar tal-molekula, ligands mhux marbuta, eċċ mis-soluzzjoni tal-proteina. Din is-sustanza tista 'effettivament tneħħi dawn l-impuritajiet żgħar tal-molekula minn soluzzjonijiet ta' proteina, u b'hekk ittejjeb il-purità tal-proteini. L-effett ta 'passatur molekulari tiegħu jippermetti li dawn l-impuritajiet żgħar tal-molekula jitneħħew b'mod effettiv, li jirriżulta f'aċidi nuklejiċi aktar pur. Il-preparazzjonijiet ta 'l-enżimi tipikament fihom impuritajiet żgħar ta' molekula bħal substrati, inibituri, metaboliti, eċċ. Dawn l-impuritajiet jistgħu jaffettwaw l-attività u l-istabbiltà ta 'l-enzimi. Permezz tal-filtrazzjoni tal-ġel tal-materjal, dawn l-impuritajiet molekulari żgħar jistgħu jitneħħew b'mod effettiv u l-purità tal-preparazzjoni tal-enzimi tista 'titjieb. Minbarra l-proteini u l-aċidi nukleiċi,
Jissimula transduzzjoni tas-sinjal interċellulari
It-transduzzjoni tas-sinjal inter-ċellulari hija l-mekkaniżmu regolatorju ewlieni tal-attivitajiet tal-ħajja, li jinvolvi proċessi kumplessi bħar-rikonoxximent taċ-ċelluli, il-konverżjoni tas-sinjal, u r-rispons fiżjoloġiku. Ir-riċerka tradizzjonali ħafna drabi tiddependi fuq mudelli ta 'ċelloli ħajjin, iżda hemm limitazzjonijiet bħal netwerks ta' sinjali kumplessi u fatturi li jinterferixxu multipli.Sephadex G75huwa mezz klassiku ta 'filtrazzjoni tal-ġel dextran. L-istruttura poruża tagħha u l-effett ta 'passatur molekulari jipprovdu mudell fiżiku uniku għas-simulazzjoni tat-transduzzjoni tas-sinjal interċellulari.
Mudell fiżiku għas-simulazzjoni tat-transduzzjoni tas-sinjal interċellulari bl-użu ta 'Sephadex G-75
Simulazzjoni ta 'junctions gap interċellulari
Gap Junction huwa kanal idrofiliku ffurmat bejn ċelloli li jmissu magħhom permezz ta 'linker, li jippermetti skambju ħieles ta' molekuli żgħar b'piż molekulari<1500 Da. The pore size range of Sephadex G-75 (40-300 μ m) is much larger than that of intercellular junctions (about 1.5 nm), but its porous structure can simulate molecular diffusion processes in local microenvironments. For example:
Formazzjoni tal-gradjent ta 'molekuli tas-sinjal: konċentrazzjonijiet differenti ta' molekuli tas-sinjal (bħal cAMP, Ca ² +) huma mgħobbija fil-kolonna tal-ġel. Id-differenza tar-rata ta 'diffużjoni ta' molekuli żgħar fil-pori tal-ġel tista 'tiġi osservata permezz tal-effett ta' passatur molekulari, u t-trasmissjoni tal-gradjent ta 'sinjali kimiċi bejn iċ-ċelloli tista' tiġi simulata.
Simulazzjoni ta 'rispons sinerġistiku: Żewġ molekuli li jinteraġixxu (bħal ligand u riċettur) huma mgħobbija fuq iż-żewġt itruf tal-kolonna tal-ġel rispettivament, u l-kinetika li torbot tagħhom hija analizzata permezz tad-differenza fil-ħin ta' elużjoni biex tissimula l-proċess ta 'rikonoxximent molekulari fil-komunikazzjoni diretta ta' kuntatt bejn iċ-ċelloli.
Simulazzjoni ta 'kuntatt molekulari fuq wiċċ tal-membrana
Il-komunikazzjoni bejn il-molekuli tal-wiċċ tal-membrana tiddependi fuq l-interazzjonijiet speċifiċi tal-proteini tal-wiċċ tal-membrana taċ-ċellula. Sephadex G-75 jista 'jissimula dan il-proċess permezz ta' modifika funzjonali:
Esperiment li jorbot il-ligand tar-riċetturi: Il-proteini tar-riċetturi bijotinilati (bħal EGFR) huma ffissati fuq il-wiċċ ta 'partiċelli tal-ġel, ligands bit-tikketta fluworexxenti (bħal EGF) huma maqbuda permezz tas-sistema ta' bijotina ta 'streptavidin, u l-intensità tas-sinjal li torbot hija mmonitorjata b'ditekter tal-fluworexxenza biex tikkwantifika l-affinità tal-ligand tar-riċettur.
Analiżi li torbot kompetittiva: tagħbija minn qabel il-kumpless tal-ligand tar-riċettur fil-kolonna tal-ġel, żid inibituri kompetittivi ta 'konċentrazzjonijiet differenti (bħal antikorpi anti EGFR), ikkalkula l-kostanti ta' inibizzjoni (Ki) permezz tal-bidla tal-quċċata ta 'elużjoni, u jissimula l-effett ta' intervent ta 'drogi fuq il-mogħdijiet tas-sinjal taċ-ċellula.
Simulazzjoni ta 'trasmissjoni ta' sinjal kimiku
It-transduzzjoni tas-sinjal kimiku tiddependi fuq id-diffużjoni ta 'molekuli ta' sinjalazzjoni kimika (bħal ormoni u ċitokini) sekretati miċ-ċelloli permezz ta 'fluwidi tal-ġisem jew matriċi extraċellulari għaċ-ċelloli mmirati. Sephadex G - 75 jista 'jibni mudell ta' diffużjoni tridimensjonali:
Simulazzjoni tas-sistema paracrine: ċelloli sekrezzjonali (bħal makrofaġi) u ċelloli fil-mira (bħal ċelloli T) huma rispettivament inkapsulati fil-mikrosferi tal-ġel, u l-istatus ta 'attivazzjoni taċ-ċelloli fil-mira (bħal espressjoni CD69) huwa osservat permezz tal-kultura CO biex jissimula l-effett lokali tas-sinjali paracrine.
Trasmissjoni tas-Sinjal Endokrinali: L-ormoni bit-tikketta fluworexxenti (bħal insulina) huma mgħobbija fil-kolonna tal-ġel, u l-interazzjoni tagħhom mal-pori tal-ġel hija analizzata matul il-ħin ta 'elużjoni, u n-nofs - il-ħajja ta' ormoni fiċ-ċirkolazzjoni tad-demm u d-distribuzzjoni tal-organi mmirati huma mbassra billi tgħaqqad mudelli matematiċi.
Każ ta 'Applikazzjoni ta' Sephadex G-75 fir-Riċerka dwar is-Sinjalazzjoni taċ-Ċelluli
Riċerka dwar it-transduzzjoni tas-sinjal taċ-ċellula tad-demm aħmar u l-funzjoni tal-integrina
Ir-riċettur tal-adeżjoni tal-plejtlits Integrina IIb 3 huwa l-aktar glycoprotein abbundanti fuq il-wiċċ tal-membrana tal-plejtlits u huwa kruċjali għall-emostasi u l-formazzjoni tat-tromba. Studja l-użu ta 'Sephadex G-75 biex tissimula l-interazzjoni bejn il-plejtlits u l-kollaġen subendoteljali:
Mudell ta 'attivazzjoni ta' integrina: L-integrina purifikata IIB 3 ġiet iffissata fuq il-wiċċ ta 'partiċelli tal-ġel, u fibrinogen li jinħall (FG) ġie miżjud bħala ligand. Il-kinetika li torbot ġiet skoperta permezz ta 'reżonanza tal-plażma tal-wiċċ (SPR). Instab li l-affinità ta 'integrina ma' FG wara l-attivazzjoni tjiebet b'mod sinifikanti (KD tnaqqset minn μm għal NM).
Screening tal-mediċina kontra l-plejtlits: Il-kumpless tal-integrin FG fil-kolonna tal-ġel, żid mediċini kontra l-plejtlits ta 'konċentrazzjonijiet differenti (bħal tirofiban), ikkalkula r-rata ta' inibizzjoni ta 'mediċini fuq l-attività ta' integrina bl-elużjoni ta 'spostament tal-quċċata, u tipprovdi pjattaforma ta' skrining għolja ta '- permezz ta' mediċini antitrombotiċi ġodda.
Regolazzjoni ta 'mogħdijiet ta' sinjalazzjoni relatati mat-tumur
Iċ-ċelloli tat-tumur jippromwovu l-proliferazzjoni u l-metastażi permezz ta 'attivazzjoni anormali ta' mogħdijiet ta 'sinjalazzjoni bħal MAPK u PI3K / Akt. Sephadex G-75 jista 'jintuża biex jiżola u jippurifika l-proteini ewlenin fil-mogħdijiet ta' sinjalazzjoni:
Riċerka dwar il-mogħdija tas-sinjal EGFR: Il-proteina EGFR ġiet ippurifikata mill-filtrazzjoni tal-ġel Sephadex G-75, u l-istatus tal-fosforilazzjoni tagħha ġie analizzat bl-ispettrometrija tal-massa. Instab li l-livell ta 'fosforilazzjoni ta' siti Y1068 u Y1086 ta 'EGFR żdied b'mod sinifikanti wara l-istimulazzjoni ta' EGF, li attivat is-sinjali 'l isfel ERK1 / 2 u AKT.
Analiżi tal-mekkaniżmu tar-reżistenza għall-mediċina: fil-mediċina - ċelloli tal-kanċer gastriku reżistenti (SGC7901 / VCR), il-proteina UHRF1 ġiet iżolata u ppurifikata minn Sephadex G-75, u nstab li l-espressjoni żejda tagħha tista 'tinibixxi l-attivazzjoni ta' proteini relatati mal-apoptożi (bħal ma hija caspase-3), tnaqqas drabi).
Is-sinjalazzjoni taċ-ċelloli immuni u r-regolazzjoni tal-polisakkaridi
Polysaccharides tal-alka ħamra (BFP) isaħħu r-rispons immuni billi jattivaw il-mogħdijiet ta 'sinjalazzjoni NF - κ B u MAPK fil-makrofaġi. Riċerka dwar is-separazzjoni u l-purifikazzjoni tal-BFP u l-komponenti tagħha (F1, F2, F3) bl-użu ta 'Sephadex G-75:
Polysaccharide component analysis: BFP, F1, F2 and F3 with purity>95% kienu miksuba permezz ta 'filtrazzjoni tal-ġel Sephadex G-75 flimkien ma' kromatografija ta 'skambju ta' joni taċ-ċelluloża DEAE, u l-piżijiet molekulari tagħhom kienu 120 kDa, 85 kDa, 60 kDa u 45 kDa, rispettivament.
Attivazzjoni tal-mogħdija tas-sinjal: Fil-mudell tal-makrofage RAW264.7, BFP u l-komponenti tiegħu jistgħu jikkaġunaw b'mod sinifikanti s-sekrezzjoni ta 'NO u TNF -, u l-mekkaniżmu tiegħu jinvolvi NF - κ B traslokazzjoni nukleari u fosforilazzjoni ta' JNK, ERK, u P38 MAPK. Il-komponenti ppurifikati separati minn Sephadex G - 75 urew li F1 kellu l-effett ta 'attivazzjoni l-aktar qawwi fuq NF - κ B u l-mogħdijiet MAPK (li żżid l-ebda produzzjoni bi 2.5 darbiet u TNF - sekrezzjoni bi 3 darbiet).
It-tags Popolari: Sephadex G75 CAS 37224-29-6, fornituri, manifatturi, fabbrika, bl-ingrossa, jixtru, prezz, bl-ingrossa, għall-bejgħ